Abstract - Recombinant expression of marine shrimp lysozyme in Escherichia coli

Recombinant expression of marine shrimp lysozyme in Escherichia coli

Enrique de-la-Re-Vega
Maestria en Ciencias en Acuacultura-DICTUS
Universidad de Sonora
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Karina D. García-Orozco
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Sergio A. Calderón-Arredondo
Laboratorio de Biología Molecular de Organismos Acuáticos
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María Gabriela Romo-Figueroa
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María A. Islas-Osuna
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Gloria M. Yepiz-Plascencia
Laboratorio de Biología Molecular de Organismos Acuáticos
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Rogerio R. Sotelo-Mundo*
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*Corresponding author

Keywords: crustacea, lysozyme, penaeideae, Penaeus vannamei, recombinant expression, refolding, shrimp.

Abbreviations:
DTT: 1,4-dithiothreitol;
Gnd-HCl: guanidine hydrochloride;
Lyz: Lysozyme;
PCR: polymerase chain reaction;
PMSF: Phenylmethylsulphonyl fluoride.

Shrimp Lysozyme (Lyz) is a key component of the antibacterial response as part of the innate defense in Crustacea; however, it has not been possible to purify this protein because of the very low amount present in the shrimp blood cells (hemocytes). In an effort to produce enough protein to study its function and biochemical properties we have overexpressed Lysozyme from marine shrimp (Penaeus vannamei) in E. coli. A bacterial protein expression system based on the T7 polymerase promoter was used. Although Lyz was produced as insoluble protein in inclusion bodies, its refolding led to an active protein with a yield of ~10%. Details of the protein recombinant expression techniques applied to this shrimp protein are presented.